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用久了的色譜柱要怎么沖洗

發布時間:2018-01-22   點擊次數:2390次
  用久了的色譜柱要怎么沖洗
  衣服穿久了要洗,色譜柱用久了要沖,不過沖洗色譜柱可不像洗衣服那么簡單,到底該怎么洗,還是有些門道的:
  用什么沖洗色譜柱?
  什么叫沖洗色譜柱
  通常,色譜柱沖洗就是把色譜柱上的臟東西和對色譜柱有損壞的東西沖出來,并且保存在合適的溶劑中;還有另一種情況,也可以算作沖洗的范疇,就是梯度方法間重新平衡色譜柱的過程。
  常用的溶劑
  針對于反相色譜柱,通常是用到純的水和有機溶劑,水主要是作為沖洗掉色譜柱中的鹽和其他添加劑,而有機溶劑則是用來沖洗掉一些在色譜柱上有較強保留的污染物,除了在分析中常用到的甲醇和乙腈之外,還有一些對污染物去除能力更強的有機溶劑也可以使用,比如異丙醇。
  如何怎么沖洗色譜柱
  色譜柱的沖洗,無非兩個情況:正常情況下的沖洗和非正常情況下的沖洗
  正常情況下色譜柱的沖洗步驟
  使用不含添加劑流動相后的沖洗
  正常情況下,僅僅是對色譜柱進行流動相替換和凈化,對于一般的方法,只需在方法結束后使用高比例的有機相比如甲醇或者乙腈沖洗色譜柱大約20倍柱體積即可。
  使用含鹽或添加劑后的沖洗
  如果是使用的到的方法的流動相中含有緩沖鹽或者其他添加劑的時候,先要使用和方法流動相起始比例相同的純水相替代緩沖鹽一相,沖洗20倍柱體積之后,再換上高比例有機相沖洗20倍柱體積。
  色譜柱沖洗后的保存
  對于色譜柱的保存,一般是存放在純的有機相中,短期存放,甲醇乙腈均可,長期存放,建議儲存在甲醇中。
  非正常狀況下的沖洗
  色譜柱如果是非正常的狀況,就要考慮一些不走尋常路的沖洗辦法了:
  什么叫做非正常狀況?常見的有兩種,柱效下降和堵塞:
  柱效下降色譜柱的沖洗
  對于柱效下降,我們首先要確定是色譜柱的問題而不是由于儀器或分析方法造成的,排除這兩者,如果不是色譜柱損壞比如塌陷(物理沖擊造成),鍵合相水解(高溫低pH下長時間使用),硅膠基質水解(高pH下使用)等不可逆損傷造成的柱效下降,因為排除上述問題外,多數情況都是因為色譜柱不太正常的“臟”了,可以首先使用純的甲醇或乙腈長時間沖洗色譜柱,如果還不能奏效,可以考慮使用純的異丙醇沖洗色譜柱,異丙醇的洗脫能力比甲醇乙腈更強,能把很多這兩種溶劑無法沖洗的污染物從色譜柱上洗脫下來。如果效果仍舊不明顯,可以參考色譜柱說明書中的“色譜柱再生”一項里面的說法,使用更加強大的溶劑沖洗,不過這些溶劑通常不是常用的反相液相色譜溶劑。
  堵塞色譜柱的沖洗
  如果是遇到堵塞的情況,首先要確定堵塞是由于什么原因引起的,如果是由于色譜柱中殘留的緩沖鹽引起的,這是zui萬幸的堵塞了,色譜柱可以嘗試用高比例的水相(推薦95%)在較高的溫度下沖洗色譜柱。
  如果是由于樣品原因導致色譜柱堵塞,又要考慮另外的辦法,如果是樣品中含有太多吸附性很強的物質(有時是復雜樣品中的某些雜質,無法通過過濾離心等辦法去除)沉積吸附在柱頭導致堵塞,可以嘗試使用不同的溶劑(對此類物質有較好溶解性的)慢慢沖洗。
  如果是由于樣品過濾不當或者樣品在色譜柱上析出導致某些顆粒雜質堵塞了色譜柱,除了嘗試尋找合適溶劑沖洗之外,只能考慮反沖了,通常,不建議反沖色譜柱,因為可能對色譜柱造成較大損害,所以反沖是迫不得已的死馬當活馬醫的辦法,一定要慎用。做好樣品的前處理并使用預柱或在線過濾器才是保護色譜柱的好辦法!
  快速沖洗色譜柱
  看上去很好很強大的說法,其實很簡單,在沖洗色譜柱的時候,可以通過增加流速來縮短沖洗時間,我們已經知道色譜柱沖洗的完全程度是通過體積衡量的,所以提高流速是可以節省下時間的。但是要特別注意的是,對于堵塞的色譜柱,提高流速可能并不是個很可行的辦法。
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